តម្រង fluorescence គឺជាសមាសធាតុសំខាន់មួយនៅក្នុងមីក្រូទស្សន៍ fluorescence ។ ប្រព័ន្ធធម្មតាមានតម្រងមូលដ្ឋានចំនួនបី៖ តម្រងរំភើប តម្រងបំភាយ និងកញ្ចក់ dichroic ។ ពួកវាត្រូវបានខ្ចប់ជាទូទៅក្នុងគូបមួយដើម្បីឱ្យក្រុមត្រូវបានបញ្ចូលជាមួយគ្នាទៅក្នុងមីក្រូទស្សន៍។
តើតម្រង fluorescence ដំណើរការយ៉ាងដូចម្តេច?
តម្រងរំភើប
តម្រងរំភើបបញ្ជូនពន្លឺនៃប្រវែងរលកជាក់លាក់មួយ និងរារាំងរយៈចម្ងាយរលកផ្សេងទៀត។ ពួកវាអាចប្រើដើម្បីបង្កើតពណ៌ផ្សេងៗបានដោយការកែសម្រួលតម្រង ដើម្បីអនុញ្ញាតឱ្យមានពណ៌តែមួយឆ្លងកាត់។ តម្រងរំភើបមានជាពីរប្រភេទចម្បង — តម្រងឆ្លងកាត់វែង និងតម្រងឆ្លងកាត់ក្រុម។ ជាធម្មតា Exciter គឺជាតម្រង bandpass ដែលឆ្លងកាត់តែរលកពន្លឺដែលស្រូបយកដោយ fluorophore ដូច្នេះកាត់បន្ថយការរំភើបនៃប្រភពផ្សេងទៀតនៃ fluorescence និងរារាំងពន្លឺរំភើបនៅក្នុងក្រុមបំភាយ fluorescence ។ ដូចដែលបានបង្ហាញដោយបន្ទាត់ពណ៌ខៀវនៅក្នុងរូបភាព BP គឺ 460-495 ដែលមានន័យថាវាអាចឆ្លងកាត់បានតែ fluorescence នៃ 460-495nm ។
វាត្រូវបានដាក់នៅក្នុងផ្លូវបំភ្លឺនៃមីក្រូទស្សន៍ហ្វ្លុយអូរីស និងត្រងចេញនូវគ្រប់ប្រវែងរលកនៃប្រភពពន្លឺ លើកលែងតែជួររំភើបនៃ fluorophore ។ ការបញ្ជូនអប្បបរមានៃតម្រងកំណត់កម្រិតពន្លឺ និងពន្លឺនៃរូបភាព។ ការបញ្ជូនអប្បរមានៃ 40% សម្រាប់តម្រងរំភើបណាមួយត្រូវបានណែនាំ ថាការបញ្ជូននេះគឺល្អ>85%។ កម្រិតបញ្ជូននៃតម្រងរំភើបគួរតែស្ថិតនៅក្នុងជួររំភើបនៃ fluorophore ទាំងស្រុង ដែលប្រវែងរលកកណ្តាល (CWL) នៃតម្រងគឺនៅជិតបំផុតតាមដែលអាចធ្វើទៅបានទៅនឹងប្រវែងរលករំភើបបំផុតនៃ fluorophore ។ ដង់ស៊ីតេអុបទិកនៃតម្រងរំភើប (OD) កំណត់ភាពងងឹតនៃរូបភាពផ្ទៃខាងក្រោយ។ OD គឺជារង្វាស់នៃរបៀបដែលតម្រងមួយរារាំងប្រវែងរលកនៅខាងក្រៅជួរបញ្ជូន ឬកម្រិតបញ្ជូន។ OD អប្បបរមានៃ 3.0 ត្រូវបានណែនាំ ប៉ុន្តែ OD នៃ 6.0 ឬធំជាងនេះគឺល្អ។
តម្រងបំភាយ
តម្រងបំភាយមានគោលបំណងអនុញ្ញាតឱ្យ fluorescence ដែលចង់បានពីគំរូទៅដល់ឧបករណ៍ចាប់។ ពួកវារារាំងប្រវែងរលកខ្លីជាង និងមានការបញ្ជូនខ្ពស់សម្រាប់ប្រវែងរលកវែងជាង។ ប្រភេទតម្រងក៏ត្រូវបានភ្ជាប់ជាមួយលេខផងដែរ ឧទាហរណ៍ BA510IF នៅក្នុងរូបភាព (តម្រងរារាំងការជ្រៀតជ្រែក) ការកំណត់នោះសំដៅទៅលើរលកចម្ងាយនៅ 50% នៃការបញ្ជូនអតិបរមារបស់វា។
អនុសាសន៍ដូចគ្នាសម្រាប់តម្រងរំភើបគឺជាការពិតសម្រាប់តម្រងបំភាយ៖ ការបញ្ជូនអប្បបរមា កម្រិតបញ្ជូន OD និង CWL ។ តម្រងការបំភាយជាមួយនឹង CWL ដ៏ល្អ ការបញ្ជូនអប្បបរមា និងការរួមបញ្ចូលគ្នា OD ផ្តល់នូវរូបភាពភ្លឺបំផុត ជាមួយនឹងការទប់ស្កាត់យ៉ាងជ្រៅបំផុត និងធានាការរកឃើញនូវសញ្ញានៃការបំភាយតិចតួចបំផុត។
កញ្ចក់ Dichroic
កញ្ចក់ dichroic ត្រូវបានដាក់នៅចន្លោះតម្រងរំភើប និងតម្រងបំភាយនៅមុំ 45° ហើយឆ្លុះបញ្ចាំងពីសញ្ញារំភើបឆ្ពោះទៅរក fluorophore ខណៈពេលដែលបញ្ជូនសញ្ញាបំភាយឧស្ម័នឆ្ពោះទៅរកឧបករណ៍ចាប់។ តម្រង dichroic ដ៏ល្អ និងឧបករណ៍បំបែកធ្នឹមមានការផ្លាស់ប្តូរយ៉ាងខ្លាំងរវាងការឆ្លុះបញ្ចាំងអតិបរមា និងការបញ្ជូនអតិបរមា ដោយមានការឆ្លុះបញ្ចាំង> 95% សម្រាប់កម្រិតបញ្ជូននៃតម្រងរំភើប និងការបញ្ជូន> 90% សម្រាប់កម្រិតបញ្ជូននៃតម្រងបំភាយ។ ជ្រើសរើសតម្រងដែលមានប្រវែងរលកប្រសព្វ (λ) នៃ fluorophore ក្នុងចិត្ត ដើម្បីកាត់បន្ថយពន្លឺភ្លឹបភ្លែតៗ និងបង្កើនសមាមាត្រសញ្ញារូបភាពទៅសំឡេងរំខាន fluorescent អតិបរមា។
កញ្ចក់ dichroic នៅក្នុងតួលេខនេះគឺ DM505 ដែលត្រូវបានគេដាក់ឈ្មោះដូច្នេះដោយសារតែ 505 nanometers គឺជារលកចម្ងាយនៅ 50% នៃការបញ្ជូនអតិបរមាសម្រាប់កញ្ចក់នេះ។ ខ្សែកោងបញ្ជូនសម្រាប់កញ្ចក់នេះបង្ហាញពីការបញ្ជូនខ្ពស់លើសពី 505 nm ការធ្លាក់ចុះយ៉ាងខ្លាំងនៃការបញ្ជូនទៅខាងឆ្វេងនៃ 505 nanometers និងការឆ្លុះបញ្ចាំងអតិបរមាទៅខាងឆ្វេងនៃ 505 nanometers ប៉ុន្តែនៅតែអាចមានការបញ្ជូនមួយចំនួនក្រោម 505 nm ។
តើអ្វីជាភាពខុសគ្នារវាង long pass និង band pass filters?
តម្រង fluorescence អាចត្រូវបានចែកចេញជាពីរប្រភេទ: រយៈពេលវែង (LP) និង Band Pass (BP) ។
តម្រងឆ្លងកាត់វែងបញ្ជូនរលកប្រវែងវែង និងរារាំងខ្លីជាង។ ប្រវែងរលកកាត់គឺជាតម្លៃនៅ 50% នៃការបញ្ជូនខ្ពស់បំផុត ហើយប្រវែងរលកទាំងអស់ខាងលើការកាត់ត្រូវបានបញ្ជូនដោយតម្រងឆ្លងកាត់វែង។ ពួកវាត្រូវបានគេប្រើជាញឹកញាប់នៅក្នុងកញ្ចក់ dichroic និងតម្រងបំភាយ។ តម្រង Longpass គួរតែត្រូវបានប្រើនៅពេលដែលកម្មវិធីទាមទារការប្រមូលការបំភាយឧស្ម័នអតិបរមា ហើយនៅពេលដែលការរើសអើងវិសាលគមមិនគួរឱ្យចង់បាន ឬចាំបាច់ ដែលជាទូទៅជាករណីសម្រាប់ការស៊ើបអង្កេតដែលបង្កើតប្រភេទសត្វបញ្ចេញតែមួយនៅក្នុងគំរូដែលមានកម្រិតទាបនៃ autofluorescence ផ្ទៃខាងក្រោយ។
Band pass filters គ្រាន់តែបញ្ជូនរលកពន្លឺជាក់លាក់មួយប៉ុណ្ណោះ ហើយរារាំងអ្នកផ្សេងទៀត។ ពួកគេកាត់បន្ថយ crosstalk ដោយអនុញ្ញាតឱ្យបញ្ជូនតែផ្នែកខ្លាំងបំផុតនៃវិសាលគមការបំភាយ fluorophore ប៉ុណ្ណោះដែលត្រូវបានបញ្ជូន កាត់បន្ថយសំលេងរំខាន autofluorescence ហើយដូច្នេះធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវអនុបាត signal-to-noise នៅក្នុងសំណាក autofluorescence ផ្ទៃខាងក្រោយខ្ពស់ ដែលតម្រងឆ្លងកាត់វែងមិនអាចផ្តល់ជូនបាន។
តើសំណុំតម្រងហ្វ្លុយអូរីសប៉ុន្មានប្រភេទដែល BestScope អាចផ្គត់ផ្គង់បាន?
ប្រភេទតម្រងទូទៅមួយចំនួនរួមមានតម្រងពណ៌ខៀវ បៃតង និងអ៊ុលត្រាវីយូឡេ។ ដូចដែលបានបង្ហាញក្នុងតារាង។
| សំណុំតម្រង | តម្រងរំភើប | កញ្ចក់ Dichroic | តម្រងរបាំង | អំពូល LED ប្រវែងរលក | ការដាក់ពាក្យ |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | · FITC: វិធីសាស្ត្រអង្គបដិប្រាណ fluorescent ·អាស៊ីតទឹកក្រូច: DNA, RNA · Auramine: Tubercle bacillus · EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | · Rhodamine, TRITC: វិធីសាស្ត្រអង្គបដិប្រាណ fluorescent · Propidium iodide: DNA · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · ការសង្កេតដោយស្វ័យប្រវត្តិ fluorescence · DAPI: ស្នាមប្រឡាក់ DNA · Hoechest 332528, 33342: ប្រើសម្រាប់ស្នាមប្រឡាក់ក្រូម៉ូសូម |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | · Catecholamines 5- អ៊ីដ្រូស៊ីត ទ្រីបតាមីន · Tetracycline: គ្រោងឆ្អឹង, ធ្មេញ |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | · ស៊ី ៥ · Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
សំណុំតម្រងដែលត្រូវបានប្រើក្នុងការទិញ fluorescence ត្រូវបានរចនាជុំវិញប្រវែងរលកធំៗដែលត្រូវបានប្រើក្នុងកម្មវិធី fluorescence ដែលមានមូលដ្ឋានជុំវិញ fluorophores ដែលប្រើច្រើនបំផុត។ សម្រាប់ហេតុផលនេះ ពួកគេក៏ត្រូវបានគេដាក់ឈ្មោះតាម fluorophore ដែលពួកគេត្រូវបានបម្រុងទុកសម្រាប់រូបភាពដូចជា DAPI (ពណ៌ខៀវ), FITC (បៃតង) ឬគូបតម្រង TRITC (ក្រហម) ។
| សំណុំតម្រង | តម្រងរំភើប | កញ្ចក់ Dichroic | តម្រងរបាំង | អំពូល LED ប្រវែងរលក |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| រដ្ឋតិចសាស់ក្រហម | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
តើអ្នកជ្រើសរើសតម្រង fluorescence យ៉ាងដូចម្តេច?
1. គោលការណ៍នៃការជ្រើសរើសតម្រង fluorescence គឺដើម្បីឱ្យពន្លឺ fluorescence/emission ឆ្លងកាត់ចុងបញ្ចប់នៃរូបភាពតាមដែលអាចធ្វើទៅបាន ហើយបិទទាំងស្រុងនូវពន្លឺរំភើបក្នុងពេលតែមួយ ដើម្បីទទួលបានសមាមាត្រសញ្ញា-សំឡេងរំខានខ្ពស់បំផុត។ ជាពិសេសសម្រាប់ការអនុវត្តការរំភើបចិត្តពហុហ្វូតុន និងមីក្រូទស្សន៍ឆ្លុះបញ្ចាំងខាងក្នុងសរុប សំឡេងខ្សោយក៏នឹងបង្កឱ្យមានការជ្រៀតជ្រែកយ៉ាងខ្លាំងចំពោះឥទ្ធិពលនៃរូបភាព ដូច្នេះតម្រូវការសម្រាប់សមាមាត្រសញ្ញាទៅនឹងសំឡេងរំខានគឺខ្ពស់ជាង។
2. ដឹងពីវិសាលគមនៃការរំជើបរំជួល និងការបំភាយនៃ fluorophore ។ ដើម្បីបង្កើតសំណុំតម្រង fluorescence ដែលបង្កើតរូបភាពដែលមានគុណភាពខ្ពស់ កម្រិតពណ៌ខ្ពស់ជាមួយនឹងផ្ទៃខាងក្រោយខ្មៅ តម្រងរំភើប និងការបញ្ចេញឧស្ម័នគួរតែសម្រេចបាននូវការបញ្ជូនខ្ពស់ជាមួយនឹងរលកឆ្លងកាត់តិចតួចបំផុតនៅលើតំបន់ដែលត្រូវនឹងកំពូលនៃការរំភើប fluorophore ឬការបំភាយឧស្ម័ន។
3. ពិចារណាពីភាពធន់នៃតម្រង fluorescence ។ តម្រងទាំងនេះត្រូវតែមិនជ្រាបចូលប្រភពពន្លឺខ្លាំងដែលបង្កើតពន្លឺអ៊ុលត្រាវីយូឡេ (UV) ដែលអាចនាំឱ្យ "ឆេះ" ជាពិសេសតម្រង exciter ព្រោះវាត្រូវបានទទួលរងនូវអាំងតង់ស៊ីតេពេញលេញនៃប្រភពពន្លឺ។
រូបភាពគំរូ fluorescent ផ្សេងគ្នា
ធនធានត្រូវបានប្រមូល និងរៀបចំនៅលើអ៊ីនធឺណិត ហើយត្រូវបានប្រើប្រាស់សម្រាប់តែការសិក្សា និងការទំនាក់ទំនងប៉ុណ្ណោះ។ ប្រសិនបើមានការបំពាន សូមទាក់ទងមកយើងខ្ញុំដើម្បីលុបចេញ។
ពេលវេលាបង្ហោះ៖ ថ្ងៃទី ០៩ ខែ ធ្នូ ឆ្នាំ ២០២២